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《中國農業大學學報》 2020年09期
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肉雞成肌細胞的分離培養與鑒定陳凱凱張成*趙菲王馳王孝成耿照玉姜潤深

(安徽農業大學動物科技學院  合肥230036)  
【摘要】:為建立肉雞成肌細胞的體外分離、培養及鑒定體系,選取11d雞胚為材料,利用Ⅰ型膠原酶消化雞胚胸肌,差速貼壁法分離純化成肌細胞,優化成肌細胞培養條件;通過細胞形態學觀察和成肌分化標志基因表達情況進行細胞鑒定,并利用含2%馬血清的培養基誘導其成肌分化。結果表明:分離獲得的細胞貼壁后呈紡錘形,39.5℃培養條件下細胞增殖速度顯著高于37.0℃(P0.05);經實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測分析,增殖期與分化期均有成肌細胞的特異性標志基因成肌因子5(Myogenic factor 5,Myf5)與成肌分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)的表達,且與增殖期相比,成肌細胞分化期肌細胞生成素(Myogenin,MyoG)與肌肉調節因子4(Muscle regulatory factor,MRF4)基因表達量顯著升高(P0.05);此外,細胞增殖期結蛋白(Desmin)和分化期肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain,MyHC)呈陽性表達。綜上,成功分離獲得了肉雞成肌細胞,并在39.5℃培養條件下具有更好的增殖能力,為研究肌肉發育及其營養調控機制奠定了基礎。

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