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《中華肺部疾病雜志(電子版)》 2020年04期
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Gasdermin D蛋白對內毒素導致肺泡巨噬細胞焦亡的影響

帥維正1李軍2陳旭昕3李大偉1張志成1100048北京  北京解放軍總醫院第六醫學中心重癥醫學科1  衛勤部2呼吸與危重醫學科  
【摘要】:目的 探討Gasdermin D(GSDMD)蛋白在內毒素導致肺泡巨噬細胞焦亡中的作用。方法使用小干擾RNA技術建立GSDMD蛋白低表達的MH-S細胞株。將細胞分為野生型MH-S細胞組(WT)、轉染空病毒載體的空白對照細胞組(NC)和GSDMD敲低MH-S細胞組(KD),分別接受PBS、LPS+尼日利亞菌素和LPS+霍亂毒素B亞單位進行處理。通過測定其乳酸脫氫酶(LDH)和IL-1β,熒光顯微鏡下觀察細胞PI染色情況,RT-qPCR和蛋白免疫印跡檢測焦亡相關蛋白表達等指標,來判定MH-S細胞有無焦亡發生和炎癥因子水平的差異。結果 在接受LPS+nigericin和LPS+CTB的處理后,三組細胞均出現了焦亡現象。其中KD組接受LPS+nigericin刺激后,細胞培養上清LDH水平和IL-1β濃度明顯低于WT和NC組(P0.05); PI染色陽性百分比明顯少于WT和NC組(P0.05);而GSDMD mRNA相對表達量和GSDMD-NT蛋白相對表達量也是三組中最低的(P0.05)。而在經LPS+CTB處理后,WT和NC組細胞死亡發生率明顯高于KD組(P0.01);細胞上清中IL-1β水平和PI染色陽性百分比增加幅度也是WT和NC組更大(P0.05)。此外,KD組中GSDMD mRNA相對表達量和GSDMD-NT蛋白相對表達量相較于另兩組也是更低的(P0.05)。結論 下調MH-S細胞GSDMD蛋白表達可以起到抑制LPS導致的MH-S細胞焦亡和IL-1β分泌釋放的作用。

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